超微量分光光度计的常识普及

 超微量分光光度计的常识：
当我们获得了nano600超微量分光光度计检测结果后，对光谱的正确分析至关重要。
输出结果的含义：
 

1. A260nm——核酸最高吸收峰的吸收波长。
2. A280nm——蛋白最高吸收峰的吸收波长。
3. A230nm——是碳水化合物最高吸收峰的吸收波长。
4. A340nm——是基线校准波长，为检测溶液样品的浊度和其他干扰因子。该值应该接近0.0。如果不是，表明溶液中有悬浮物，需要纯化样品。纯样品的A340一般是0。

●A230产生负值主要是由于在很低 DNA 浓度的溶液中的一些其他成分的干扰所导致的。在下一个测定中，需要降低样品的稀释度，A230的负值会被校正。
●A260/A280比值可进行核酸样品纯度评估：纯DNA的A260/A280比值为1.8，纯 RNA的A260/A280比值为2.0。如果比值低，表示受到蛋白（芳香族）或酚类物质的污染，需要纯化样品。
● A260/A230比值可进行核酸样品纯度评估：纯 DNA和RNA的A260/A230比值为 1.8 – 2.2。若比值小于1.8表明样品被碳水化合物（糖类）、盐类或有机溶剂污染，需要纯化样品。当 260/230<1 时，通常只有两种情况。一是胍盐污染，二是蛋白污染。
 
样本的不同提取方法对检测的影响: 
● 苯酚/ Trizol萃取——残留试剂污染可以通过220至240nm之间的异常光谱以及260至280nm区域的偏移来表示。加氯仿离心后取上清的时候千万不要贪多，那样就很容易被蛋白污染。
●纯化柱提取——残留胍可能有助于230nm附近的峰值和从230nm到240nm的波谷偏移。
●磁珠法提取——残余珠可能会导致光散射，并导致异常光谱。
超微量分光光度计的操作注意事项:
 1. A260/A280、A260/A230比值受溶液酸碱度及离子强度的影响，如酸溶液会使A260/A280比值降低，低离子强度和低 pH 溶液会增加 280 nm 处的光吸收值。因此必须确保空白检测和溶解样品所用Buffer的离子浓度和pH值一致。
2. 浓度接近2 ng/μl浓度的样品可能会导致不可靠的260/280和/或260/230的比值。
3. 样品的稀释浓度同样是不可忽视的因素，由于样品中不可避免存在一些细小的颗粒，尤其是核酸样品。这些小颗粒的存在会干扰测试效果。样品的浓度不能过低，或者过高（超过光度计的测试范围）。
4. 样品混合要充分，否则吸光值太低，甚至出现负值；混合液不能存在气泡，空白液无悬浮物，否则读数漂移剧烈。样品混合不均匀会直接导致检测不确定，重复性低。
5. 样品检测上样量不能太少，必须能够保证能后连接上下两根光纤形成光柱，从而使得检测正常进行。
6. 样品台清洁，在检测前，检测后以及连续使用仪器30分钟后均需要对上下接触样品的部位用双蒸水或纯水擦拭。
7. 切忌不可用喷壶在样品台上喷射，以防液体液体进入仪器内部造成损坏。
8. 切忌不可用洗涤剂或异丙醇清洁基座。
9. 仪器放置位置应当远离通风口，以免液滴蒸发太快导致浓度读数偏大。
     
以上就是上海金鹏分析仪器有限公司为大家整理总结关于超微量分光光度计的一些常识。
 
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